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壳聚糖/卵透明带DNA避孕疫苗两种粘膜免疫途径的评价

目的:评价卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒经滴鼻和阴道免疫两种途径诱发的粘膜免疫反应、抗生育作用和对卵巢结构的影响,提高卵透明带DNA避孕疫苗的避孕率,并进一步探讨用粘膜免疫避免卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的可行性。方法:制备pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒,分别滴鼻和阴道免疫10只BALB/c小鼠,对照组免疫不含DNA的壳聚糖,第3周和第6周分别加强免疫一次,ELISA法检测小鼠血清、阴道冲洗液中抗pZP3 IgA和IgG抗体;首次免疫后第10周与有生育力的雄鼠合笼交配,统计怀孕雌鼠动物数;首次免疫后第13周解剖动物取出双侧卵巢,制作石蜡切片,作卵巢组织病理学观察。为检测卵透明带DNA避孕疫苗pZP3α抗原在体内的表达,构建重组质粒pEGFP-N1-pZP3α,与壳聚糖制备成纳米微粒,经鼻粘膜和阴道粘膜免疫小鼠,免疫后第2、4、6、8、10天解剖动物,取滴鼻免疫小鼠的气管、肺部组织和阴道免疫小  (本文共68页) 本文目录 | 阅读全文>>

广西医科大学
广西医科大学

遗传性共济失调线粒体DNA部分点突变的研究

目的探索线粒体DNA 点突变与遗传性共济失调的关系。方法采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增临床确诊为遗传性共济失调的30 例患者及其部分亲属和35 例健康对照组外周血白细胞的4 个mtDNA 片断,即点3243、8993、8344 和点11778 所在片断。对点3243、8993 的PCR 产物采用限制片断长度多态性(restriction fragment length polymophism, RFLP)分析法检测该片断中有无A3243G、T8993G 或T8993C点突变;对点8344、11778 的PCR 产物进行单链构象多态性分析(single strand conformation polymorphism, SSCP),并与患者亲属及健康人进行比较。对SSCP出现异常条带的研究对象进行相应mtDNA 片断测序。结果所有研究对象均未检测到A3243G、T8993G 或...  (本文共40页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建医科大学
福建医科大学

人精子特异性乳酸脱氢酶的原核表达、DNA疫苗的构建及其基因免疫效果的初步鉴定

精子特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenaseC4,LDH-C4),特异地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,是精子能量代谢的一个关键酶,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系。LDH-C4具有很强的免疫原性。动物实验表明,LDH-C4可在多种哺乳动物体内诱导抗LDH-C4抗体产生,后者可导致动物的生育率明显降低,且作用可逆。LDH-C4的精子特异性及其良好的免疫原性使其成为一个很好的避孕疫苗候选对象。本研究利用分子克隆技术,以人睾丸λTripEx cDNA文库为模板,PCR扩增人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-C4)编码序列,并将其插入原核表达载体pET-28a(+),构建原核重组表达载体pET-28a(+)—hLDHC4,在E.coli BL21(DE3 plysS+)中诱导hLDH-C4的His-融合蛋白的表达。通过12%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白免疫印迹、酶活性测定和酶谱分析鉴定表达...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

海南大学
海南大学

一些金属配合物与DNA相互作用研究

脱氧核糖核酸(DNA)是生物体中最重要的遗传物质,它在遗传信息的储存、复制及转录中都具有非常重要的作用,是基因表达的基础。DNA作为目标分子用于识别在抑制细胞功能紊乱和治疗某些疾病中的天然和人工分子,这在无机生物化学中是极其重要的。为了进一步探索和认识DNA的性质、结构、行为、形态,揭示生命的奥秘,人们研究了大量的小分子特别是过渡金属配合物与DNA之间的作用,并且许多小分子现已成功地用作DNA足迹试剂,定位碱基错配试剂,以及DNA的结构探针。通常,小分子与DNA作用有三种结合方式:嵌插作用、沟结合和静电作用。在这三种方式中,嵌插作用是最强的一种,因为嵌插分子的平面插入芳香杂环和DNA的碱基对之间。对于小分子来说,分子的哪一部分插入DNA是很重要的因为它不仅有利于探索和开发新的核酸探针,而且有助于从分子水平上了解抗癌药物的作用机理,并为设计合成具有应用前景的高效的疾病诊断和化疗药物提供有用的信息。本论文的主要目的是在研究鬼臼酰肼金...  (本文共72页) 本文目录 | 阅读全文>>

湖南农业大学
湖南农业大学

湖南柑橘黄龙病检测及DNA片段克隆

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing)是由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter)引起的一种柑橘毁灭性病害,危害轻者可引起树势衰退,产量下降,品质变劣;重者可引起成片柑橘树死亡,对柑橘生产构成严重障碍。湖南与广东、广西接壤,是柑橘黄龙病偶发区。近年来,随全球气温变暖,木虱活动范围扩大,柑橘黄龙病存在潜在威胁,并且在少数柑橘产区已出现柑橘黄龙病的疑似症状,有的甚至出现大片橘树枯死和毁园的现象。为进一步了解柑桔黄龙病的发生情况及传播途径,以便及时采取有效控制措施,杜绝病源传播。本研究于2005年4月至2006年3月对全省柑橘主产区的48份材料进行了PCR检测和IR(Idione Reactio)快速检测,同时进行了PCR片段克隆、测序。研究结果如下:1.在前人研究的基础上,对柑橘黄龙病PCR检测技术进行改进,建立了准确、快速、灵敏、稳定、安全的柑桔黄龙病菌PCR检测体系。以夏梢的韧皮部为材料,提取...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

《教育观察》2019年30期
教育观察

基于科学思维的“DNA是主要的遗传物质”教学设计

"科学思维"是指尊重事实和证据、崇尚严谨和务实的求知态度,运用科学思维的方法认识事物、解决实际问题的思维习惯和能力。"DNA是主要的遗...  (本文共2页) 阅读全文>>