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重组类人胶原蛋白(Ⅱ)分离纯化的工艺研究

蛋白质的分离纯化是生化分离工程的一个重要组成部分,本文主要研究重组类人胶原蛋白Ⅱ纯化工艺。基因工程菌E·coli BL 21经细胞破碎、沉淀、超滤分离后,再通过离子交换层析纯化,得到较高纯度类人胶原蛋白Ⅱ。在细胞破碎阶段,通过对细胞破碎方法的选择,系统研究了高压匀浆过程物理和化学因素的影响。包括操作方式、匀浆次数、操作压力、料液悬浮浓度的影响。从而选择采用高压匀浆法批式循环,经2次破碎,操作压力为70MPa、菌体悬浮液浓度为:菌体质量:水体积=1:10。建立破碎率随操作压力变化的方程S=1-(e~(0.058*2~(-0.005)p~(0.906))~(-1)。在沉淀阶段,通过单因素实验逐个确定沉淀各条件的范围,采用L_(16)(4~5)正交表,经方差分析确定沉淀条件为pH2.8,NaCl浓度5%、温度18℃,蛋白浓度5g/L。沉淀后,重组类人胶原蛋白Ⅱ的纯度达到37.68%,回收率达到88.73%。在超滤阶段,采用截留分子量为  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北大学
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重组类人胶原蛋白HCB1分离纯化研究

本文通过基因工程菌高密度发酵获得类人胶原蛋白胞内产物,通过菌体破碎及一系列处理分离和纯化类人胶原蛋白HCB1,得到了获得高纯度类人胶原蛋白的优化工艺条件。(一)粗提:采用超声破碎法破碎20分钟,破碎率可达87%,破碎液中类人胶原蛋白浓度达2.78g/L;用饱和度范围为15~65%的硫酸铵盐析,采用L_9(3~4)正交表,经方差分析确定盐析条件为pH 2.9,温度10℃,蛋白浓度2g/L,盐析后类人胶原蛋白纯度达36.8%,回收率达90.2%。(二)纯化:采用了两种方法并进行了对比。(1)离子交换层析与凝胶过滤层析相结合。采用批量层析的操作方法在pH7.5条件下用DE52树脂吸附杂蛋白,收集吸附后的上清液,经Sephadex G—100凝胶过滤层析柱,洗脱液为20mmol/L Tris—HCl(pH7.5含20mmol/L NaCl)缓冲液。可获得纯度为98%的类人胶原蛋白,总回收率为60.7%。(2)金属离子螯合亲和层析一步纯化...  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北大学
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重组类人胶原蛋白I的分离纯化研究

本文主要研究重组类人胶原蛋白Ⅰ的基因工程下游工艺。将基因工程菌E·coli BL21经高压匀浆、硫酸铵盐析、超滤浓缩后,得到类人胶原蛋白Ⅰ的粗品。再通过对离子交换批量层析与凝胶过滤层析相结合的方法和离子交换柱层析一步法进行比较,得到了获得高纯度类人胶原蛋白Ⅰ的优化工艺条件。1 粗提:采用高压匀浆法破碎20分钟,破碎率可达78.7%,破碎液中类人胶原蛋白浓度达2.56g/L;用饱和度范围为20~50%的硫酸铵盐析,采用L_9(3~4)正交表,经方差分析确定盐析条件为pH2.9,温度18℃,蛋白浓度3g/L,盐析后类人胶原蛋白纯度达36.8%,回收率达92.7%。2 纯化:采用了两种方法并进行了对比。(1)离子交换批量层析与凝胶过滤层析相结合。采用批量层析的操作条件为:选用DEAE-52阴离子交换树脂,用Tris-HCl缓冲液配置,在pH6.0、NaCl含量为0.2mol/L、蛋白进样浓度3g/L的条件下进行批量层析,吸附时间为60...  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

《微生物学通报》2020年12期
微生物学通报

Ⅲ型类人胶原蛋白在大肠杆菌重组表达及发酵制备

【背景】胶原蛋白广泛应用于日用化工及生物医药中,相比传统方法,基因工程方法制备胶原蛋白具有避免病毒隐患、产量高等优点,逐步受到广泛关注。【目的】获得III型类人胶原蛋白基因,实现大肠杆菌中的异源表达。【方法】以人III型胶原蛋白α1链为模板,(Gly-X-Y)为最小研究单位,优选亲水性氨基酸,设计目标基因kit,构...  (本文共8页) 阅读全文>>

《皮肤病与性病》2021年01期
皮肤病与性病

复方甘草酸苷片联合类人胶原蛋白敷料治疗面部激素依赖性皮炎疗效观察

目的观察复方甘草酸苷片联合类人胶原蛋白敷料治疗面部激素依赖性皮炎的临床疗效。方法将某医院2016年4月到2019年4月收治的80例面部激素依赖性皮炎患者为观察对象,随机将其平均分成两组,每组40例。两组均给予复方甘草...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国城乡企业卫生》2017年02期
中国城乡企业卫生

类人胶原蛋白治疗面部脂溢性皮炎的效果

目的探讨类人胶原蛋白敷料对面部脂溢性皮炎患者皮肤屏障功能的影响。方法选择深圳市龙岗区第二人民医院2014年4月-2016年1月收治的84例面部脂溢性皮肤炎患者为研究对象,以随机数字表法分为对照组和观察组各42例,对照组使用酮康唑乳膏治疗,观察组...  (本文共2页) 阅读全文>>

《高校化学工程学报》2005年03期
高校化学工程学报

金属螯合亲和层析在纯化重组类人胶原蛋白中的应用

研究了应用金属螯合亲和层析法纯化重组类人胶原蛋白的条件。分别考察了不同金属离子、平衡缓冲液pH值及两种洗脱方法对纯化结果的影响。结果表明,用锌离子螯合介质,...  (本文共4页) 阅读全文>>