分享到:

草甘膦N-乙酰转移酶基因的克隆、酶学性质研究及AlbD酶S40位点饱和突变分析

相关推荐

·华中农业大学

草甘膦N-乙酰转移酶(GAT)能通过N-乙酰化的作用使草甘膦脱毒,在抗除草剂转基因作物中具有潜在的应用价值。本实验通过PCR程序首次从提取的土壤总DNA中扩增出草甘膦N-乙酰转移酶基因(gat基因)。酶解后插入表达载体pGEX-6p-1,获得重组质粒pGEX-gat。将它转入大肠杆菌DH5α,获得可以表达GST-GAT融合蛋白的重组菌株。基因测序表明,与来自地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的AX543338核苷酸序列有99.3%的同源性,与AX543339和AX543340分别有93%和95.2%的同源性。将GAT酶用亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳,结果显示gat基因表达了17kDa的蛋白质,与来自GAT酶基因序列所推导的分子量一致。对该酶的酶学性质进行了分析,结果表明,该酶的最适温度为30℃,最适反应pH为7。同时检测了6种金属离子对酶活性的影响,发现虽然GAT的活性不依赖于金属离子的存在,  (本文共57页) 本文目录 | 阅读全文>>